雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計是一種常用的實(shí)驗室儀器,用于測量物質(zhì)在紫外和可見(jiàn)光范圍內對光的吸收和透射性質(zhì)。它基于分光技術(shù)和光電檢測技術(shù),能夠準確地測量樣品溶液或氣體的吸收光譜,并提供豐富的光學(xué)參數。其原理基于比較法和比色法。
比較法:分光光度計使用的是雙光束設計。它將參考光與樣品光同時(shí)照射在檢測器上。檢測器通過(guò)光電效應將光信號轉化為電信號,并將兩個(gè)信號進(jìn)行比較。當樣品溶液對某個(gè)特定波長(cháng)的光吸收較少時(shí),參考光和樣品光的強度差異很小,電信號也相近。當樣品溶液對這個(gè)波長(cháng)的光吸收增加時(shí),樣品光的強度減弱,從而導致參考光和樣品光之間的強度差異增大,電信號也相應增大。
比色法:雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計也可以采用比色法測量。在該方法中,使用一個(gè)底物試劑或標準物質(zhì),并針對特定反應選擇一個(gè)適當的波長(cháng)。當底物試劑與樣品發(fā)生化學(xué)反應時(shí),會(huì )產(chǎn)生染色反應,并在特定波長(cháng)下吸收光線(xiàn)。通過(guò)測量吸光度的變化,可以確定樣品的濃度或反應的程度。
雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計的光學(xué)系統由光源、單色器、光束分離器和探測器組成。光源產(chǎn)生寬帶光源(通常包含紫外和可見(jiàn)光),單色器根據需要選擇特定波長(cháng)的光線(xiàn),光束分離器將光線(xiàn)分成參考光和樣品光,光電二極管探測器負責測量光的強度。通過(guò)檢測器獲得的光信號轉化為電信號后,通過(guò)一系列的電路處理和轉換,可以得到吸光度(Absorbance)或透光度(Transmittance)值??梢岳眠@些數值制作吸收光譜圖、透射光譜圖或濃度-吸光度曲線(xiàn)等。進(jìn)一步的數據分析包括峰值尋找、吸收峰面積計算和濃度計算等。